這篇論文介紹了一種用于定量分析人血漿中綠原酸（Chlorogenic acid）的液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）方法，并將其應用于中國晚期實體腫瘤患者的藥代動力學研究。

研究背景

1、綠原酸是一種由咖啡酸和奎寧酸形成的脫羧酸，常見于咖啡、綠茶和一些中藥中。綠原酸具有抗炎、抗氧化和清除自由基的作用，并顯示出有效的抗癌活性。然而，目前缺乏一種簡單、快速且可靠的定量分析方法來研究綠原酸在人體內的藥代動力學。

2、現有的LC-MS/MS方法存在一些缺點，如需要大量血漿樣本、復雜的提取系統和較長的分析時間，這些都限制了綠原酸在臨床應用中的研究。

3、之前的研究主要集中在同時測定綠原酸與其他化合物，但這些方法在血漿樣本需求量、提取復雜性和分析時間上存在不足。

研究方法

1、開發了一種簡單、快速且特異的LC-MS/MS方法，用于定量分析人血漿中的綠原酸。使用新綠原酸作為內標，血漿樣本用甲醇沉淀處理。

2、色譜分離在Zorbax C18柱上進行，流動相為含0.1%甲酸的甲醇-水梯度洗脫，流速為0.4 mL/min。

3、質譜檢測在負離子模式下進行，采用多重反應監測（MRM）模式，綠原酸和內標的MRM轉換均為m/z 353.2 → 191.2。

4、方法在10-2000 ng/mL濃度范圍內進行了全面驗證，日內和日間精密度（RSD%）均在10.7%以內，準確度（RE%）在-3.0%到10.6%之間。

實驗設計

1、標準溶液和工作溶液的制備：綠原酸標準溶液和工作溶液在不同濃度下制備，并存儲在-30°C。

2、樣本處理：血漿樣本與內標和甲醇混合后，經過渦旋和離心處理，最終上機分析。

3、方法驗證：包括選擇性、校準曲線性能、準確度、精密度、稀釋完整性、靈敏度、攜帶效應、穩定性、回收率和基質效應等方面的驗證。

結果與討論

1、提取方法優化：選擇甲醇作為沉淀劑，因其能提供更干凈的色譜圖，并在樣本制備過程中加入0.1%甲酸以提高綠原酸的穩定性。

2、內標選擇：新綠原酸被選為內標，因其結構與綠原酸相似，且在MRM通道中沒有顯著干擾。

3、LC-MS/MS方法優化：負離子模式提供了更強的信號強度，最終選擇了甲醇-水（0.1%甲酸）系統作為流動相。

4、方法驗證結果：日內和日間精密度和準確度均在可接受范圍內，稀釋完整性和靈敏度也符合要求。攜帶效應和基質效應在可接受范圍內，穩定性測試結果表明綠原酸在不同條件下具有良好的穩定性。

臨床應用

1、該方法成功應用于中國晚期實體腫瘤患者注射用綠原酸（CAFI）后的藥代動力學研究。

2、11名受試者接受了不同劑量的CAFI注射，血液樣本在不同時間點采集并分析。

3、結果顯示，綠原酸在體內中度吸收，平均達峰時間為1小時，快速消除，半衰期為1小時。多次給藥后沒有明顯積累，顯示出良好的安全性。

總體結論

開發了一種簡單、特異、快速的LC-MS/MS方法，用于定量分析人血漿中的綠原酸。該方法已成功應用于中國晚期實體腫瘤患者的藥代動力學研究，提供了重要的藥代動力學參數，為進一步研究CAFI在腫瘤患者中的應用提供了指導。

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